Hela kanser hücrelerini etiketlemek amacı ile lipid bazlı nanopartikül ile transfeksiyonu

Abstract

Kanser, çağımızda dünyada ölümlerin ve hastanın yaşam kalitesi ve süresini düşüren en önemli hastalık olarak belirtilebilmektedir. Günümüzde geleneksel tedavi yöntemlerinin yetersiz kalması ve/veya yan etkilere sahip olması nedeni ile immünoterapi yöntemi geliştirilmiştir. Kanser immünoterapisi, kanser hücrelerinin yerini tespit etmek ve yok etmek için hastanın immün sisteminin güçlendirilmesine dayanan bir yöntemdir. Katı lipid nanopartiküller, 2000’li yılların başında geliştirilen, başlıca gen aktarım çalışmalarında kullanılan kendine has avantaj ve dezavantajları olan taşıyıcı sistemlerdir. Nanopartiküllerin hedef hücreye aktarımı en az yapısı ve özellikleri kadar önemli olduğundan, hedef hücrenin özelliklerine uygun çeşitli ligandlar kullanılarak konjugasyonu ile hedeflendirilme yapılmaktadır. Sunulan tez çalışmasında kanser immünoterapisinde kullanılmak üzere hedeflendirilmiş katı lipid nanopartiküllerin sentezi ve karakterizasyon çalışmalarının yapılması hedeflenmektedir. Ardından HeLa serviks kanseri hücre hattı üzerinde gen aktarım etkinliği, mutajenitesi ve oksidatif stresi belirlenmiştir. Oktadesilamin bazlı katı lipid nanopartiküller (ON), tekli emülsiyon (w/o) çözücü difüzyon yöntemiyle sentezlenmiştir. xvii Nanopartiküllerin karakterizasyon çalışmalarının ardından uygun seçilen partikül ile folik asit konjugatı (OFAN) elde edilmiştir. Nanopartiküllerin zeta potansiyel değerleri, ortalama parçacık boyutu ve polidispersite indeksi (PDI) dinamik ışık saçılımı (DLS) yöntemi ile belirlenmiştir. Nanopartiküllerin morfolojik analizleri taramalı elektron mikroskobu (SEM) ve atomik güç mikroskobu (AFM) ile belirlenmiştir. Partiküllerin yapısını oluşturan fonksiyonel gruplar ve kimyasal bağlar Fourier Dönüşümlü Kızılötesi Spektroskopisi (FT-IR) ile belirlenmiştir. Oktadesilamin ve folik asit bağlı oktadesilamin nanopartiküllerin hücre canlılığı MTT analizi ile tayin edilmiştir. Sentezlenen nanopartiküller ile transfer edilecek pEGFP N1-IL-6 plazmidi çoğaltılmış ve saflaştırılmıştır. HeLa serviks kanseri hücrelerine oktadesilamin ve folik asit bağlı oktadesilamin nanopartiküller ile gen aktarımı yapılarak transfeksiyon etkinliği değerlendirilmiştir. Transfeksiyon etkinliği 24 saat boyunca inverted mikroskop kullanılarak GFP ışımasının takip edilmesiyle belirlenmiştir. Gen aktarımı ile hücrelerde meydana gelen immün yanıtın değerlendirilebilmesi için transfekte edilmiş HeLa serviks kanseri hücreleri ile makrofajlara farklılaştırılmış THP-1 monosit hücreleri ko-kültür modeli oluşturulmuştur. 72 saatin ardından vasatlar toplanarak nanopartiküllerin antioksidan-oksidan kapasiteleri ve hücre döngüsüne olan etkileri ilgili ticari kitler kullanılarak değerlendirilmiştir.