Peptid protein kovalent konjugasyonu

Abstract

Peptidlerin taşıyıcı proteinlere bağlanması, zayıf immunojenik özellikteki peptidlere karşı antikor oluşturmak için gerekmektedir. Sulu çözeltideki moleküllerin karboksil gruplarının aktivasyonu ve aktive olmuş karboksil gruplarına amino gruplarının kovalent bağlanması, bu tez çalışmamızın konusuolan globular yapıdaki protein ile sentetik peptidlerin konjugasyon reaksiyonunun temelini oluşturmaktadır. Karbodiimidler heterobifonksiyonel özellikteki direkt (zero-length) çapraz bağlama reaktifleridir ve karboksil gruplarının amino gruplarına bağlanmasında kullanılırlar. Bu tez çalışmamızda karbodiimid yöntemi ile suda çözünen 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) karbodiimid hidroklorid (EDC) kullanılarak, Peptid-Protein konjugatları hazırlandı. Konjugasyonda bir protein molekülü için peptidin farklı oranları (npeptid/nBSA) ile çalışıldı ve bu orantılara ait biyokonjugatlar sentezlendi. Sentezlenmiş biyokonjugatlar farklı kolonlardan geçirilerek saflaştırıldı. Saflaştırılan biyokonjugatların, sentetik peptid, BSA ve BSA-sentetik peptid fiziki karışımları ile karşılaştırmalı olarak karakterizasyonu ve bağlanma mekanizmasının incelenmesi, HPLC, GPC-VISCOTEK (Gel Permeation Chromatography, UV, Refraktif İndeks, Vizkozite ve Işık Saçılması Detektörlerine Sahip Kromatografik Sistem), Fluoresans Spektrofotometre ve Zetasizer (Partikülboyutu ve Zeta Potansiyel ölçümü için) cihazları kullanılarak gerçekleştirildi. Fiziko-kimyasal analiz sonuçlarına dayanarak globular BSA moleküllerinin lineer yapılı peptid molekülleri ile kovalent bağlanması sonucu elde edilen biyokonjugatların oluşum mekanizması, elektrik yükü ve üç boyutlu yapısı incelenmiştir.