Halofilik bir candida türünden NAD+-bağımlı format dehidrogenaz geninin klonlanması ve heterolog ekspresyonu

Abstract

NAD+ bağımlı format dehidrogenazlar (FDH, EC 1.2.1.2), kiral moleküllerin sentezi için kullanılan ve pahalı bir koenzim olan NAD(P)H' nin yenilenmesi ve CO2 indirgenmesi reaksiyonları için endüstriyel önemi olan enzimlerdir. Bu enzimler daha ayrıntılı yapıların sentezinde yapı taşları olarak değerli olan saf alkollerin oluşturulması için aldehitlerin ve ketonların enzimatik indirgenmesinde NADH'nin yeniden üretilmesinde kullanılabilmektedir. Enzim stabilitesi, endüstriyel biyotransformasyon işlemlerinin gelişimi için sınırlayıcı bir faktördür. Mikroorganizmalarda bulunan FDH’ler daha yüksek enzimatik aktiviteye sahiptir. Bu durumdan dolayı daha çok mikroorganizma kaynaklı FDH' ler üzerine çalışmalar gerçekleşmektedir. Bu çalışma kapsamında FDH, halofilik bir mikroorganizmadan izole edilerek Escherichia coli’de rekombinant olarak eksprese edilmiştir. Rekombinant CdFDH proteinin homoloji modelinin yapılmasının ardından aktivite deneyleri yapılarak elde edilen CdFDH enziminin farklı pH koşulları altında enzimatik aktiviteye sahip olduğu gösterilmiştir.