Proteinlerin fluoresans maddeler ile işaretlenmesi

Abstract

Fluoresans madde ile işaretlenen antikorlar, antijenler ve DNA oligonükleotidleri biyolojik maddelerin tayininde yer alan analiz yöntemlerinin geliştirilmesinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu fluoresans maddeler proteinlerin amino asit yan zincirlerine ya da oligonfikleotidlere eklenen modifîye bazların özel gruplarına kovalent olarak bağlanmaktadır. Bu çalışmada BSA'nın Fluoresein izotiyosiyanat (FITC) ile işaretlenme işlemi farklı reaksiyon koşullarında incelendi. Daha sonra, protein A kolonu ite saflaştırılan Anti-CD4 monokkraal antikorları FITC ile işaretlendi. Anti-CD8 antikor örneği için ön saflaştırma yapılmadı. Doğrudan FITC ile işaretleme gerçekleştirildi. İşaretli anti-CD8 antikorlarının lenfosit yüzeyine bağlanması "flow-cytometry* ile gözlendi. Ek olarak, BSA'nın pirenil izotiyosiyanat ile bağlanması incelendi. Anti-CD8 antikorları da bu madde ile işaretlendi. "Time-Master" spektrofluorometre kullanılarak bu işaretli BSA ve antikorların fluorasans bozunma grafikleri ve zaman ayırımh fluoresans spektrumlan (TRES) alındı, fluoresans ömürleri hesaplandı.