Trichoderma atroviride'den elde edilen kitinazın kısmi saflaştırılması

Abstract

Kitinazlar [E.C.3.2.1.14], β-1,4-bağlı N-asetil-D-glukozaminin doğrusal bir homopolimeriolan kitini hidroliz eden enzimlerdir. Kitin birçok alg ve mantarın hücre duvarlarının böceklerin ve eklembacaklıların dış iskeletlerinin, deniz omurgasızlarının kabuklarının, temel bileşenidir. Kitin ve kitinolitik enzimler biyoteknolojik uygulamalar için büyük bir öneme sahiptir. Özellikle, kitinazlar bitki patojenlerini kontrol amaçlı tarımda kullanılırlar. Kitinazlar ve kitinin enzimatik hidrolizi ile oluşan kitooligomerler aynı zamanda insan sağlığınınkorunmasında kullanılabilirler. Farklı açılardan kitinazların kullanımındaki başarı makul maliyette yüksek aktiviteli preparasyonların elde edilmesine bağlıdır. Bu nedenle, kitinolitikenzimlerin genetik ve biyokimyasının, filogenetik akrabalıklarının ve değerlendirme metotlarının anlaşılması, bu enzimleri yakın gelecekte çeşitli proseslerde kullanılabilir kılacaktır. Kitinin yıkımı ve kitinazlar, biyolojik ve biyoteknolojik proseslerin geniş bir kısmında önemli bir yere sahiptir. Kitin artıklarının çevresel temizliğinden, insan hastalıklarının tedavisine,bitki savunma sistemlerine ve biyolojik kontrole kadar uzanan birçok alanda öneme sahiptirler. Bu nedenlerle bitki biyokontrolünde sıkça kullanılan bir küf mantarı olan Trichoderma atroviride'nin ürettiği kitinaz enzimi incelendi. Patates-dekstroz agar üzerinde yetiştirilen T. atroviride'den kitinaz indüksiyonu, Dana ve arkadaşlarının önerdiği sıvı besiyerinde sağlandı. T. atroviride'nin yer değiştirme yöntemi kullanılarak, %0.1 kolloidalkitin içeren sıvı besiyerinde, 30 ºC'de 48 saat boyunca çalkalamalı inkübasyonu sonucu maksimum kitinaz aktivitesi elde edildi. Kitinaz enzimine amonyum sülfat tuzu, etanol, aseton ve trikloroasetik asit gibi farklı çöktürme yöntemlerinin etkisi incelendi.