Diyagnostik amaçlı estradiol-"horseradish" peroksidaz konjugatı hazırlanması ve karakterizasyonu

Abstract

Kadın üreme steroid hormonu 17P-estradiol, esas olarak yumurtalıklarda ve daha az miktarda adrenal korteks, teslisler ve periferal dokularda üretilmektedir. Bu hormon reprodüksiyon (üreme) ve sekonder seks karakterlerinin anatomik ve fizyolojik gelişimine katkıda bulunmak tadır. Ayrıca kemik gelişimi, intraselüler kalsiyum konsantrasyonu ve ikinci mesaj molekülle rinin aktivitesini de etkilemektedir. Biyolojik örneklerde estradiol tayini immünolojik yöntemler ile yapılmaktadır. 17p Estradiol tayininde genellikle kullanılan, bağlı spesifik antikorlar bulunduran ve radyoaktif izotoplar, farklı türde enzimler veya lüminesans maddeler ile işaretli estradiol içeren kitler ticari olarak temin edilebilmektedir. Bu çalışma klinik laboratuvarlarında yer alan bir enzimatik kitin geliştirilmesinde kullanmak üzere, enzim ile işaretlenmiş 17p-estradiol hazırlanmasına odaklanmıştır. Bu maksatla hormon, hem grubu bulunduran bir protein olan ve molekül tartısı 40.000 dalton dolayında bulunan "horseradish" peroksidaz enzimi ile işaretlendi. "Horseradish" peroksidaz 17(5 - estradiol-6-(0-karboksimetil)-oksim türevine kovalant olarak bağlandı. Estradiol-HRP kovalent bağlanması FTIR ve HPLC teknikleri ile incelendi. Ticari enzimatik estradiol kitinin spesifik antikorlar bulunduran kuyucuklarına, elde edilen estradiol-HRP konjugatının bağlan ması Elisa Okuyucusu vasıtasıyla gözlendi. Ek olarak, elde edilen Estradiol-BSA konjugatına Rodamin izotiyosiyanat kovalent olarak bağlandı. Estradiol-BSA-RITC konjugatının fuloresans karakteristikleri tayin edildi.