Selülaz-dekstran konjugatlarının incelenmesi

Abstract

Selüloz bitkilerde bulunan başlıca polisakkariddir ve yeryüzünde en çok bulunan biyolojik materyaldir. Ayrıca atıklarda önemli oranda selüloz bulunması, selülozu parçalayan enzimleri önemli kılmaktadır. Selülozu parçalayan enzimler selülazlar olarak isimlendirilmektedir ki bu enzimler üç tür aktivite göstermektedir, (1) endonükleaz (l,4-P-ı>4-glukanohidrolaz, E.C. 3.2.1.4) selüloz molekülünün iç kısmında yer alan bağlan hidrolizler, (2) sellobiyohidrolaz (l,4-P-D-4-glukan sellobiyohidrolaz, E.C. 3.2.1.91) selüloz zincirinde uçlarda yer alan bağlan kırar ve (3) P-glukosidaz (P-d- glukosid glukohidrolaz, E.C. 3.2.1.21) sellobiyoz ve diğer ufak oligosakkaridleri D-glukoza hidrolizler. Bu çalışmada, ticari önemi olan selülaz türlerinden Aspergillus niger'dsn elde edilen selülaz kullanıldı. Satın alınan enzim Sephadex G-50 kolonundan geçirilerek saflaştırıldı. Farklı pH ve sıcaklık değerlerinde aktivite tayini yapılarak optimum pH ve sıcaklık değeri belirlendi. Dekstran'a enzimi kovalent olarak bağlamak için sodyum periyodat ile yükseltgeyerek aldehid türevi elde edildi. Dekstran aldehid türevinin oluştuğu FTIR spektroskopisi ile kontrol edildi. Dekstranda oluşan aldehid grubu sayısını tayin için spektrofotometrik yöntem geliştirildi. Polimerin proteine bağlanması BSA ile ön çalışma yapılarak kontrol edildi. Oluşan konjugat FTIR ve GPC cihazında incelendLBunu takiben selülazın polimer ile bağlanma reaksiyonu gerçekleştirildi. Oluşan konjugat FTIR, GPC, HPLC cihazlarında incelendikten sonra farklı pH ve sıcaklıklarda aktivite tayinleri yapıldı, ve alınan sonuçlar saf enzim ile elde edilenler ile kıyaslandı. Aynı yöntemler kullanılarak, polimer ile enzimin fiziksel karışımı da incelendi. Sonuç olarak, enzim-dekstran fiziksel karışımı ve enzim-dekstran kovalent konjugatlan enzime kıyasla pH 3-7 aralığında daha yüksek aktivite gösterdi. Fiziksel kanşım ve kovalent konjugatlar optimum pH 3'te bütün sıcaklıklarda saf enzime göre daha yüksek aktivite verdi.