Bruselloza karşı endemik Brucella Abortus’tan rekombinant omp25 proteini eldesi

Abstract

Bruselloz; insanlarda sayısız organı etkileyerek spesifik ve/veya spesifik olmayan belirtilerle hastalık yapan, laboratuvardan kaynaklı bakteriyal enfeksiyon ajanı olarak son yıllarda insidansı yükselen, hayvanlarda sıklıkla yavru atımı (düşükler) ve süt veriminin azalması gibi faktörlerden dolayı ciddi ekonomik kayıplara sebebiyet veren, ayrıca biyoterörizm saldırılarında kullanılan zoonotik bir hastalıktır. Bu hastalıktan korunmak için; insanlarda uygulanabilecek herhangi bir aşının geliştirilmemiş olması, hayvanlarda ise kulllanılan aşıların virulansı azaltılmış canlı aşı olması sebebiyle yeni teknolojik yaklaşımlarla etkin aşıların geliştirilmesine ihtiyaç duyulmaktadır. Bu amaçla sunulan tez çalışmasında Brucella abortus straininin dış membranında yer alan immunojenik özellikteki dış membran proteini Omp25’in, rekombinant DNA teknolojisi kullanılarak eldesi gerçekleştirilmiştir. Çalışmada, öncellikle Erzurum İl Gıda Tarım ve Hayvancılık Müdürlüğü’nden temin edilen endemik B. abortus tip 3 straininin Omp25 gen bölgesi uygun primerlerle amplifiye edildikten sonra pET102/D-TOPO plazmitine klonlanmıştır. DNA sekans analizi vektörün başarılı bir şekilde oluşturulduğunu doğrulamıştır. Ayrıca, yapılan filogenetik analiz, ilgili genin diğer Brucella suşları ile yakın bir genetik ilişkiye sahip olduğunu göstermiştir. Omp25 genini taşıyan plazmitler, E.coli BL21 (DE3) strainine tranforme edilerek ekspresyon gerçekleştirilmiştir. Total protein içeriğinden rOmp25 proteini Ni-NTA affinite kromatografisi yöntemi ile denatüre koşullarda saflaştırılmıştır. Saf olarak elde edilen son üründeki toplam protein konsantrasyonu BCA metodu ile 0,50 mg/mL olarak hesaplanmıştır. Tüm bu aşamalarda gerekli doğrulamalar yapılmış ve son ürün ticari olarak satın alınan rOmp25 ile karşılaştırılmıştır.