Trichoderma reesei 1A mutant suşunda pektinaz indüksiyonunun incelenmesi

Abstract

Viyana Teknik Üniversitesi'nden temin edilen Trichoderma reesei 1A mutantının pektinaz üretimine, farklı karbon kaynaklarının ve bunların farklı konsantrasyonlarının etkisi araştırıldı. Modifiye edilmiş Mandel's ve Andreotti (1978) sıvı besiyerine karbon kaynağı olarak %1 (w/v) ve %10 (w/v) konsantrasyonlarında pektin, glukoz ve gliserol ilave edildi. İndüksiyon seviyesini karşılaştırmak için kontrol olarak Trichoderma reesei QM9414 suşu kullanıldı. İnkübasyon sırasında besiyerlerinden belirli zaman aralıklarında alınan numunelerde pektinaz aktivitesi ve protein miktarları ölçüldü. Yapılan çalışmalar sonunda en yüksek aktivite 96. saatte konsantrayonu %10 (w/v) olan glukoz ve gliserol içeren ortamda görüldü. %10 (w/v) glukoz içeren ortamda spesifik aktivite 0,50 U/mg ve %10 (w/v) gliserol içeren ortamda spesifik aktivite 0,49 U/mg olarak bulundu. Bu besiyerlerinde üretilen pektinaz amonyum sülfat, aseton ve etanol ile kısmi olarak saflaştırıldı. En yüksek saflık düzeyi gliserollü ortamda %80 etanol ile yapılan çöktürmeyle elde edildi. Pektinaz ham enzime göre 33.43 kat saflaştırıldı. Elde edilen sonuçlar 1A mutantının pektinaz üretim kapasitesinin kontrole göre yüksek olduğunu ve kısmi olarak daha yüksek seviyelerde saflaştırılabildiğini göstermiştir. Ancak Trichoderma reesei'nin 1A suşunun endüstriyel mutant suşu olarak kabul görebilmesi için ileri düzey çalışmalara ihtiyaç olduğunu düşünmekteyiz.