Zeytin (Olea europaea L.) bitkisinde CBF/DREB transkripsiyon faktörlerini kodlayan gen homologlarının moleküler analizleri

Abstract

Dondurucu sıcaklıklara maruz kalmadan önce, dondurucu olmayan düşük sıcaklık koşullarını yaşayan bitkilerin donma toleranslarında artış görülmektedir. Bu süreç, soğuk aklimitasyonu olarak adlandırılmaktadır. CBF/DREB1 (C-tekrarları bağlanma faktörleri/ dehidrasyon tepki elementi bağlanma faktörü 1) genleri küçük bir transkripsiyonel aktivatör ailesini kodlar. Bu genler, donma toleransında ve soğuk aklimitasyonunda rol almaktadırlar.Transkripsiyonel aktivatör CBF1 DNA bağlanması için AP2 bölgesine sahiptir ve soğuk aklimasyonu yanıtını düzenler. CBF geni ilk olarak Arabidopsis thaliana L.'da tanımlanmıştır. Daha sonra CBF homologları Brassica napus L., Hordeum vulgare L. , Zea mays L., Gossypium hirsutum L., Triticum aestivum L., Capsella bursa-pastoris, Populus spp. , Eucalyptus spp. , Prunus avium L., Malus baccata L. türü bitkilerden izole edilmiştir. CBF/DREB1 proteinleri AP2/ERF DNA bağlanma proteinleri ailesinin üyesidir. PKK/RPAGRxKFxETRHP ve DSAWR olmak üzere karakteristik 2 nükleotit dizinine sahiptir. CBF 213 aminoasitlik bir proteindir. N-ucu bölgesi (1-32), çekirdek sinyal (33-44), AP2 bölgesi (48-106) ve asidik bölge (107-213) içermektedir.Bu çalışmada soğuk stresi verilen Olea europaea L. yapraklarından total RNA ve mRNA izolasyonları yapılmıştır. Laboratuvarımızda daha önce yapılmış olan çalışmalarda elde edile CBF1 AP2 kodlayıcı bölgenin dizinleri kullanılarak primerler tasarlanmıştır. Bunlar tam uzunlukta cDNA elde etmek için uygulanan RACE reaksiyonlarında kullanılmıştır. 280, 300, 800 baz çifti büyüklüğünde çeşitli cDNA fragmanları sentezlenmiş ve bunlar PFEM-Teasy vektörüne klonlanarak dizin analizleri yaptırılmıştır. Blast analizleri yapıldığında cDNA'lar CBF'den farklı genlere benzerlik göstermiştir. 15 dk, 30 dk, 1 saat ve 4 saat stres verilmiş örneklerden total RNA izolasyonu ve klonlama çalışmaları devam etmektedir.