Özet:
Kan örneklerinde lemfosit sayımı genellikle mikroskop kullanarak, kısa sürede çok sayıda sonuç vermek durumunda olan büyük laboratuvarlarda otomatik hücre sayım aletleri ile yapılmaktadır. Mikroskop ile hücre sayımı zahmetli ve çalışan kişilere bağlı olarak sistematik hatalara fazla rastlanan bir yöntemdir. Otomatik hücre sayım aletleri ise oldukça pahalıdır. Bu konuda, klinik laboratuvar pratiğine faydalı olmak düşüncesiyle, yapılan çalışmada kan örneklerinde lemfosit tayini için kolay, duyarlı ve güvenilir spektrofotometrik yöntem geliştirilmesi incelendi. Bu çalışmada, alman kan örneklerinde lemfositler dansite gradient yöntemi ile ayrıldı. Lemfosit hücreleri pH 9.5 olan karbonat tampon çözeltisinde 42 ° C'da yaran saat ısıtılarak tümüyle parçalandı. Elde edilen hücre içeriği trinitrobenzen sülfonik asid ile pH 9.5 olan karbonat tamponunda 42 ° C'da 1 saat reaksiyona maruz bırakıldı. Oluşan renkli ürünün absorbsiyon spektrumunda 350 nm ve 420 nın'de yer alan pikler dikkate alınarak kalibrasyon eğrileri çizildi, ikinci olarak, lemfosit miktar tayini için Lowry yönteminden yararlanıldı. Bu yöntemde 650 nm ve 750 nm'de ölçülen absorbsiyon değerleri ile kalibrasyon eğrileri çizildi. Bu iki yöntem ve mikroskopta sayım ile alman sonuçlar kıyaslandı. Klinik değerlendirmelerde kanda lökosit sayısının değeri genellikle lemfosit sayışma göre daha fazla önem taşımaktadır. Kanda lökosit sayısı da mikroskop ya da otomatik hücre sayım aletleri ile yapılmaktadır. Bu nedenle, çalışmada ek olarak kan örnekleri için spektrofotometrik lökosit tayin yöntemi geliştirilmesi incelendi. Belirtilen yöntemde peroksidaz enziminin o-dianisidin ile reaksiyonu dikkate alındı. 400 nm'de ölçülen absorbsiyon değerleri ile kalibrasyon eğrisi çizildi. Sonuçlar otomatik hücre sayım aletinde elde edilen değerler ile kıyaslandı.
